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基本屬性:
【產品名稱】 | 小反芻獸疫通用型/疫苗株/野毒株(PPR-U/ PPR-V/ PPR-W)三重核酸檢測試劑盒 |
【型號】 | GOY-M1910 |
【包裝規格】 | 50次/盒 |
特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。 2.引物和探針經過優化,靈敏性高。 3.提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。 4.特異性高,引物是根據曲霉屬通用DNA高度保守區設計,不會跟其他微生物的DNA發生交叉反應。 5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。 6.本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。 7本產品只能用于科研。 |
【使用方法】
一、稀釋標準曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。 1.標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。 2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。 3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 5.換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。 6.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7.如果有N個樣品待提取,設置N+2個提取,多出的是PC(樣品制備陽性對照)和NC(樣品制備陰性對照)。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。 8.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數兼容。 三Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行) 9.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR 陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10.在標記管中按下表加入各成分 |
數據處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。
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