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            豬藍耳病毒經典型/高致病性(PRRSV-C/PRRSV-M)雙重核酸檢測試劑盒

            簡要描述:豬藍耳病毒經典型/高致病性(PRRSV-C/PRRSV-M)雙重核酸檢測試劑盒操作簡單為了使實驗結果穩定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進行提取,嚴格按照對應試劑盒說明書進行操作,樣本核酸提取過程中應避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。

            • 產品型號:GOY-M1906
            • 廠商性質:科研
            • 更新時間:2023-03-13 13:23:34
            • 訪  問  量:29

            詳細介紹

            基本屬性:

                                              【產品名稱】
                          豬藍耳病毒經典型/高致病性(PRRSV-C/PRRSV-M)雙重核酸檢測試劑盒
                                              【型號
                                           GOY-M1906
                                              【包裝規格】
                                                50次/盒  

              特點:

            1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

            2.引物和探針經過優化,靈敏性高。

            3.提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

            4.特異性高,引物是根據曲霉屬通用DNA高度保守區設計,不會跟其他微生物的DNA發生交叉反應。

            5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。

            6.本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

            7本產品只能用于科研。

            【使用方法】

            一、稀釋標準曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

            1.標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

            2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。

            3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

            4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

            5.換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

            6.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

            二、樣品 DNA 的制備

            7.如果有N個樣品待提取,設置N+2個提取,多出的是PC(樣品制備陽性對照)和NC(樣品制備陰性對照)。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。

            8.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數兼容。

            三Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)

            9.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR

            陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

            10.在標記管中按下表加入各成

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            數據處理 

            12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

            13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

             公司產品僅供科研使用,不得用于臨床!如您有任何疑問,可在線咨詢或直接電話我們,我們專?業的技術人員會及時答復您! 

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