ELISA試劑盒用純化的豬（Cortisol）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入豬（Cortisol），再與HRP標記的豬（Cortisol）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬（Cortisol）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中（Cortisol）濃度。

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