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            內皮素ELISA試劑盒使用時正確的操作步驟

            發布時間:2023-01-10      點擊次數:87

              內皮素ELISA試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯免疫吸附檢測技術(ELISA)。測定樣品中人內皮素1水平。向預先包被了抗人內皮素1抗體的酶標孔中,加入標準品和樣本,溫育后,加入生物素標記的抗內皮素1抗體。再與HRP標記的鏈霉親和素結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入顯色底物TMB,產生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。最后,在450nm處測定反應孔樣品吸光度(OD)值,樣本中的人內皮素1濃度與OD值成正比,通過繪制標準曲線計算出樣本中人內皮素1的濃度。

              

              內皮素ELISA試劑盒操作步驟

              

              1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。

              

              2.分組:取出96孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。

              

              注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。

              

              3.加樣:依照標準品的順序分別加入00ul的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入00ul的蒸餾水;其余微孔中加入00ul的待測樣本。

              

              4.加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。

              

              5.溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于37℃恒溫孵育小時。

              

              6.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置5-30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙*拍干。

              

              7.顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。

              

              8.終止:25-37℃下避光反應0-5分鐘,加入50ul終止液。

              

              9.讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。

              

              內皮素ELISA試劑盒切勿冷凍,避免陽光直曬。未使用完的酶標板條應密封,2-8℃保存,具有方便、快速、靈敏等特點,因其性質、使用方便、價格低廉等特點。

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